前言：一篇好文章的誕生，需要你不斷地搜集資料、整理思路，本站小編為你收集了豐富的小豚鼠主題范文，僅供參考，歡迎閱讀并收藏。
有一次，我往籠子里放進去兩片胡蘿卜，剩下的幾片我放在籠子上面。過了一會兒，我再來一看，嘿，這兩個小東西已經把籠子里的那兩片胡蘿卜吃完了，正并排蹲在那兒抬著頭，眼巴巴地望著籠子頂上的幾片胡蘿卜，小嘴不停地動著，饞得口水都快流出來了。一看那樣子我就笑了，趕忙拿了那幾片胡蘿卜送給它們吃。還有一次，我拿了幾片白菜葉從籠邊走過。
只見它們的四只小眼睛一直盯著這兩片白菜葉，還不停地叫著，好像在說：“我要吃白菜！我要吃白菜！你為什么不給我們呀？”我沖它們笑了笑說：“小傻瓜，這些白菜太臟了，吃了會生病的，我馬上給你們換些干凈的來，好好等著，誰再叫就不給誰吃。”它們好似聽懂了我的話，不再叫喚了。可眼睛還是盯著我手里的菜葉，我趕快拿來一些干凈的白菜葉喂它們。剛一扔進籠子里，它們就趕快用兩只小爪子按住了菜葉，兩雙圓眼睛開始盯著我，可能是怕我反悔了再把白菜搶走。見這情景，我趕忙躲到一旁，不再去驚動它們，好讓這兩個精靈的小家伙安心地吃。
小豚鼠不光吃東西有意思，睡覺也挺有趣。它們睡覺的時候肚皮總是緊緊地貼在地上，好像大地是暖和的床。它們的前腿往前伸，后腿往后伸，小眼睛閉得緊緊的，那樣子真逗人笑。
小豚鼠雖然大小便不太講衛生，但是吃東西挺講究衛生的，每次吃完了飯，它總要用小舌頭舔舔自己的小手，然后再洗一洗臉。可比那些不講衛生的小朋友乖多了。你別看這兩只小豚鼠性情那么溫柔，就猜想它們一定是慢條斯理的。其實呀，它們的動作可快了！有一次，我剛打開籠門想給它們喂點東西吃，可是，它倆一下跑了出來。當時我想：這可糟了！可還沒等我抓住它們，它倆已經扭頭又跑回了籠子，多調皮！當時我覺得又可氣又可笑，就對它們慎怪地說：“狡猾的小東西，想跟我開玩笑，是吧？”
小豚鼠還有一個最可愛之處，那就是伙伴之間重視友情。原來的兩只小豚鼠，在一起生活了很長時間，它們之間親親熱熱，玩玩鬧鬧，非常友好，誰也不欺負誰，還經常在一起說悄悄話。后來，其中的一只不幸被別人弄死了，留下的這只小豚鼠天天望著它失去伙伴的地方，十分傷心，它的眼角常常是濕潤的，像是在流淚，還不停地發出難過的叫聲，像是在呼喚它失去的朋友。為了不讓它感到寂寞，我們就又給它找來一個新伙伴。因為懷念老朋友，它開始好像不愿意跟新伙伴在一起，常常想把它拱出去。后來我們告訴它：“老朋友既然已經死了，來了新伙伴，就應該對它熱情友好，不能欺負它！”它像是聽懂了，不再往外擠它，還主動和它接近。它們漸漸地熟悉了，不再打架，也不再搶食，常親親熱熱地貼在一起我看見了心里很感動：小豚鼠這種小動物是多么可愛呀！它們那么懂得珍視友情，這種品格是可貴的！我們小朋友之間呢？也應該像它們那樣互相友愛，誰也不欺負誰；應該比它們更珍惜感情，更珍惜友誼。
【摘要】 目的：觀察健兒強身膏對支氣管哮喘豚鼠模型肺組織病理的影響。方法：采用卵蛋白（OVA）致敏法制備豚鼠哮喘模型，將豚鼠隨機分為6組，即空白對照組、模型組、陽性對照組、中藥（高、中、低）3個劑量組，分別觀察各組引喘潛伏期（T）、支氣管和肺組織的病理及超微結構變化。結果：健兒強身膏3個劑量組均能延長豚鼠哮喘誘發潛伏期，與模型組比較差異有統計學意義（P
【關鍵詞】 哮喘；健兒強身膏；豚鼠；肺組織病理
[Abstract] Objective: To observe the effect of Jianerqiangshen electuary on bronchial tube and pulmonary morphology of asthmatic guinea pigs. Methods: The asthmatic guinea pig model was established with the ovalbumin（OVA） challenge methods. Forty-eight guinea pigs were randomly pided into six groups: normal control group，asthma model group，DXM –treated group，three dose groups of Jianerqiangshen electuary. The effects of relieving asthmatic attacks were observed，and pulmonary morphology and ultramicrostructures were observed too. Results: Compared with the model group，Jianerqiangshen electuary groups could prolong the latent period of asthmatic attack significantly（P
[Key words] Asthma；Jianerqiangshen electuary；Guinea pig；Pulmonary pathology
哮喘是由多種細胞，如嗜酸性粒細胞（EOS）、肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞及氣道上皮細胞等和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥疾病，也是兒童期最常見的慢性疾病。目前，主要應用于臨床的治療藥物是緩解癥狀和控制發作的藥物。長時間使用具有一定的副作用。而中醫藥在治療哮喘方面具有效果顯著穩定、藥效持續時間長、副作用小、善于預防和治本的優點[1]。健兒強身膏是南通市中醫院江蘇省名中醫鄂惠的效應方，在臨床中能有效控制哮喘發作期癥狀，可使易感兒童呼吸道感染次數減少，哮喘的發病率下降。本實驗旨在基于顯著臨床療效的基礎上，進行其藥效學及作用機理的實驗研究，觀察其對哮喘豚鼠肺組織的病理變化，為中藥防治哮喘提供一定實驗依據。
1 材料和方法
1.1 實驗材料
1.1.1 實驗動物 健康2月齡普通級豚鼠，體重240～320 g，雌雄不拘，由南通大學實驗動物中心提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（蘇）2001-0011。實驗期間分籠飼養于安靜室內，自然光照，室溫20～26 ℃，濕度40%～70%，飼喂全價顆粒料和新鮮蔬菜，每周換墊料1次。
1.1.2 藥品及試劑 健兒強身膏口服液：由南通市中醫院制劑室按制備工藝生產提供，每毫升相當于生藥1 g[生產批文號：通制劑（2001）04—125]。藥物主要組成成分：黨參、炒白術、茯苓、炒白芍、山藥、炒谷麥芽、焦楂曲、黃芪、黃精、南北沙參、菟絲子、山芋肉、桑葚子、女貞、生熟地、川斷、陳皮、甘草、仙靈脾、天麥冬、蒸百部、紅棗、浮小麥、法半夏、黃芩、補骨脂。陽性對照藥：地塞米松磷酸鈉注射液（江蘇漣水制藥有限公司，批號：0411171）。致敏劑：卵蛋白（OVA），上海伯奧生物科技有限公司，批號0050114。
1.1.3 主要儀器 PARIBOY超聲霧化機，德國百瑞；密閉透明容器（320 mm×260 mm×200 mm），自制；奧林巴斯CX41顯微鏡，日本；形態圖像分析系統，南京捷達公司；外科手術器械1套。
1.2 實驗方法
1.2.1 動物分組及劑量 取符合實驗要求的豚鼠48只，隨機分成6組：空白對照組（正常組）、哮喘模型組、地塞米松治療組：地塞米松1 mg/kg體重、健兒強身膏低劑量組：生藥4 g/kg體重、健兒強身膏中劑量組：生藥8 g/kg體重、健兒強身膏高劑量組：生藥16 g/kg體重，每組8只。
1.2.2 造模及給藥方法 按照國際上通用的方法，以經典的卵蛋白致敏和攻擊復制動物模型[4]。除空白對照組外，其余各組動物每只分別腹腔注射10%卵蛋白生理鹽水溶液1 ml致敏，于第15、16、17天，將豚鼠逐個放入自制密閉容器中，超聲霧化機衡壓噴入1%卵蛋白生理鹽水溶液30 S任其自由吸入，觀察豚鼠呼吸節律、深度、膈肌收縮及有無抽搐跌倒等呼吸道痙攣梗阻等癥狀。其強度可分為四級：Ⅰ：呼吸加劇；Ⅱ：呼吸困難，點頭呼吸；Ⅲ：腹肌痙攣，抽搐；Ⅳ：翻滾跌倒甚至死亡。出現上述癥狀即為造模成功。此時立即取出動物，置通風處，換氣。同時記錄引喘潛伏期（T），并進行比較。潛伏期：從吸入1%卵蛋白生理鹽水溶液到腹肌痙攣、抽搐的時間。從第18天開始給藥。模型組每天給予生理鹽水10 ml/kg灌胃，中藥低、中、高各組按規定劑量灌胃，陽性對照組按1 mg/kg體重腹腔注射給藥，連續給藥18天。并與給藥后第6、12、18天分別誘喘1次，同時記錄哮喘發作潛伏期。空白組以生理鹽水替代卵蛋白同步實驗。
1.2.3 標本采集 最后1次給藥后24 h內，每只豚鼠稱重后用3%戊巴比妥鈉1 ml/kg注射，麻醉后腹主動脈放血處死。迅速選取右肺中葉于4%多聚甲醛（含1‰DEPC）中固定48 h后，常規石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡觀察。
迅速取火柴頭大小的右下肺組織標本，用3%戊二醛固定，1%四氯化鋨后固定，Epon-812樹脂包埋，做超薄切片，醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色，透射電鏡觀察并照相。
1.3 統計學方法 所有數據均用x±s表示，SPSS12.0統計軟件進行單因素方差分析， P
2 結
果
2.1 健兒強身膏對哮喘豚鼠引喘潛伏期的影響 見表1。治療后，哮喘模型組引喘潛伏期與治療前比較未見明顯差異。
2.2 肺組織病理變化觀察 正常組：細支氣管黏膜上皮排列整齊，細支氣管壁內未見炎性細胞浸潤，平滑肌周圍偶見Eos（圖1A1-2）；哮喘組：細支氣管黏膜上皮排列紊亂、增生明顯，支氣管黏膜及黏膜下層組織有大量的Eos、中性粒細胞浸潤，支氣管壁增厚，管腔狹窄，腔內有大量的上皮細胞脫落，組織黏膜充血水腫明顯等典型的氣道炎癥表現（圖1B1-2）；地塞米松治療組：組織黏膜仍有比較明顯的充血水腫等，但Eos浸潤較哮喘組豚鼠明顯減輕，可見到淋巴細胞等，腔內有少量的上皮細胞和炎性細胞。（圖1C1-2）；健兒強身膏治療組：與地塞米松治療組相似，Eos浸潤較哮喘組豚鼠明顯減輕，可見淋巴細胞等，組織仍有充血水腫，腔內有少量的上皮細胞和炎性細胞。其中高、中劑量組支氣管管腔擴大，肺泡間隔明顯變薄，肺泡腔變大，肺泡區炎癥細胞浸潤明顯減少（圖1E1-2，1F1-2），中藥低劑量組（圖1D1-2）有所減輕。
2.3 肺組織電鏡觀察結果 正常組細支氣管、肺泡壁及肺泡細胞等均正常。哮喘模型組可見嗜酸性粒細胞，可見EOS脫顆粒，顆粒中有特異性結晶核。肺泡壁擴張，毛細血管充血。肺泡Ⅱ型上皮細胞腫脹，部分空泡化，板層小體排空。健兒強身膏各治療組病變較模型組均有不同程度的減輕（圖2）。
3 討
論
哮喘，中醫認為素體肺、脾、腎三臟不足，痰飲留伏，是發病的主要內在因素，氣候轉變，寒溫失調，接觸異物，過食生冷咸酸，是發病的重要條件。中醫在哮喘防治方案中，根據正虛痰伏辨證要點，“未發以扶正氣為主，既發以攻邪為急”（《丹溪心法》），在緩解期扶脾益腎，補土生金，調其臟腑功能，去其生痰之因，以冀減輕和制止發作，臨床上常用單味黃芪、玉屏風、六味地黃丸等作為免疫增強劑[2]，以期通過提高小兒的免疫能力，來減少小兒哮喘的發作。健兒強身膏，方源取之《太平惠民和劑局方》中的四君子湯，以四君子為主方，固本以益養脾肺，又適當加用了補肺補腎之品，起到調理臟腑、強筋健骨之效。現代醫學研究表明，四君子湯可促進實驗動物產生IL-1、IL-2及干擾素[3]，具有調節巨噬細胞的功能[4]。通過實驗可以觀察到健兒強身膏的3個劑量組均能延長致敏豚鼠的引喘潛伏期，與模型組比較差異有統計學意義（P
目前病理學研究表明，支氣管哮喘氣道炎癥的病理學改變主要表現在以下幾個方面：（1）氣道黏膜組織中可見大量的炎性細胞浸潤，以嗜酸細胞(Eos)為主，其次是肥大細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等；（2）氣道上皮損傷與脫落，纖毛細胞有不同程度的損傷脫落；（3）氣道壁增厚，黏膜水腫，膠原蛋白沉著；（4）支氣管黏膜下黏液腺增生，杯狀細胞肥大、增生，氣道內黏液分泌增加并儲留在支氣管內形成黏液栓；（5）氣道平滑肌的肌層增生，基底膜變性增厚等[5-6]。其中嗜酸性粒細胞是哮喘炎癥的關鍵細胞之一，且嗜酸性粒細胞浸潤程度與哮喘病情的嚴重性相關[7-9]。其通過釋放已經生成并儲存在細胞內的炎癥介質和新生炎癥介質起作用，損傷氣道上皮。上皮細胞壞死、脫落，暴露氣道上皮神經末梢使之受損、引起膽堿能神經處于超敏狀態；氣道上皮損傷又使吸入的各種刺激物不能被及時排出并沉積在氣道黏膜表面，使氣道處于超敏狀態[10]。
本實驗研究發現：空白組的支氣管和肺組織結構正常，管腔內無明顯滲出物，支氣管黏膜上皮完整，炎性細胞浸潤少見。而哮喘模型組肺泡內有大量的炎性細胞浸潤，支氣管黏膜水腫擴張，管腔變窄；腔內可見有炎性滲出、脫落的上皮等，支氣管壁及管周大量炎性細胞浸潤呈袖套狀。電鏡觀察顯示模型組肺泡間隔明顯增厚，細胞成份增多，基底膜增厚；肺泡Ⅱ型上皮腫脹，板層體排空，可見嗜酸性細胞脫顆粒，顆粒中有特異性結晶核，支氣管平滑肌增生、肥大，肺泡壁毛細血管擴張、管壁增厚，內充滿大量紅細胞。其病理改變符合上述情況，證實模型的復制是成功的。
通過實驗我們觀察到地塞米松干預后Eos浸潤明顯減輕，病理改變明顯。目前認為地塞米松影響Eos浸潤的主要機制為抑制Eos的趨化和誘導嗜酸性粒細胞凋亡。地塞米松可作為多種炎癥介質釋放的抑制劑，而其中許多介質可誘導Eos的趨化，如PAF(血小板活化因子)、IL-5等。上皮細胞是Eos趨化因子的主要來源，亦是激素的主要靶細胞，其可使上皮細胞因子的表達顯著下調[11]。Wallen等[12]體外實驗表明地塞米松可顯著阻止IL-5、IL-3等對Eos凋亡的抑制作用，加速Eos的凋亡。國內鄧立力等[13]研究發現，地塞米松可以通過下調哮喘大鼠基質金屬蛋白酶-9的表達，糾正MMP-9/TIMP-1的平衡，抑制哮喘模型氣道平滑肌增生和氣道壁增厚。
通過對病理切片的觀察，可以發現經中藥治療后各劑量組上氣道炎癥及肺組織病理癥狀與模型組相比均有改善，其作用與劑量成正相關性。特別是大劑量組病理改變明顯減輕，支氣管周圍和黏膜層及肺泡區結構基本正常，無明顯炎性細胞浸潤，氣道、血管平滑肌及肺泡壁無明顯增厚，肺泡腔無明顯改變。證實健兒強身膏具有抑制氣道、肺組織炎癥作用，其作用效果類似地塞米松。
參考文獻
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【關鍵詞】 哮喘；氣道重構；明膠酶B；金屬蛋白酶1組織抑制劑
【Abstract】 AIM: To investigate the roles of matrix metalloproteinase9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (TIMP1) in airway remodeling of asthmaric guinea pigs. METHODS: Guinea pigs were sensitized with ovalbumin conjuncted with Al(OH)3， and subsequently challenged repeatedly with ovalbumin aerosol. The guinea pigs were randomly pided into the control group，asthmatic 4， 6， 8week groups. The expressions of MMP9 and TIMP1 in bronchi and lung tissues were observed by immunohistochemistry combined with the microimage analysis．The levels of MMP9 mRNA and TIMP1 mRNA were determined by semiquantitative PCR. RESULTS: ① After repeated allergen challenge， smooth muscle hyperplasia was obvious in guinea pig bronchi．Expression levels of MMP9 and TIMP1 in the epithelial cells of bronchi were significantly higher in asthmatic animals than those of control group． ② The expression of MMP9 in asthmatic guinea pigs lung tissues was 0.52±0.05 in 4week group， 0.74±0.05 in 6week group， 0.48±0.04 in 8week group ， 0.21±0.04 in control group （P
【Keywords】 asthma; airway remodeling; gelatinase B; tissue inhibitor of metalloproteinase1
【摘要】 目的： 探討哮喘豚鼠模型中基質金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制因子(TIMP)在哮喘氣道重構發病中的作用. 方法： 重復霧化吸人卵蛋白建立豚鼠哮喘氣道重構模型. 實驗分為對照組、哮喘激發4， 6 和8 wk組. 免疫組化方法結合顯微圖像分析檢測MMP9， TIMP1的表達. 半定量PCR檢測MMP9及TIMP1mRNA水平. 結果： ① 哮喘各組動物均出現管壁增厚、平滑肌增生等氣道重構的特征性改變. ② 哮喘豚鼠MMP9的mRNA表達：哮喘4 wk組為（0.52±0.05），哮喘6 wk組為（0.74±0.05）；哮喘8 wk組為（0.48±0.04）；對照組為（0.21±0.04）；哮喘各組與對照組組間比較差異有統計學意義（P
【關鍵詞】 哮喘；氣道重構；明膠酶B；金屬蛋白酶1組織抑制劑
氣道重構是氣道反復炎癥損傷與修復的結果，是造成哮喘患者不可逆氣道阻塞的病理生理基礎，主要表現為細胞外基質（extracellular matrix， ECM）的沉積、基底膜增厚、氣道平滑肌增生和肥厚等改變. 其中ECM在氣道壁沉積過多是引起氣道壁纖維化和氣流阻塞的主要原因之一［1］. 正常ECM的合成與降解處于一個動態平衡之中，基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinases， MMP9)與基質金屬蛋白酶抑制因子1（tissue inhibitor of metalloproteinase， TIMP1）平衡是維持ECM內環境穩定的決定因素［2］. 本實驗通過復制豚鼠哮喘模型，利用免疫組化和RTPCR方法測量不同階段哮喘豚鼠模型肺中MMP9及TIMP1含量變化，并了解MMPs/TIMP在哮喘發病中的作用.
1材料和方法
1.1材料卵蛋白、結合生物素的羊抗兔IgG血清、ABC復合物均購自美國Sigma公司；兔抗TIMP1抗體、兔抗MMP9抗體購自武漢博士德公司；Trizol試劑購自美國Invitrogen公司；Taq酶購自日本Promega公司；MMP9和TIMP1上下游引物由北京奧科公司合成；402型超聲霧化吸入器購自上海合力醫療器械廠；PTC100型PCR儀為美國BioRab公司產品；雄性豚鼠32只，體質量200～250 g，由第四軍醫大學試驗動物中心提供.
1.2方法
1.2.1動物分組及模型制備實驗動物隨機分為對照組和哮喘4， 6和8 wk組，每組8只. 各哮喘組于第1日腹腔注射卵蛋白(含等量氫氧化鋁凝膠)0.1 mg，1 wk后霧化吸人10 g/L濃度的卵蛋白溶液激發哮喘，隔日1次，每次20 min，根據分組分別激發4，6和8 wk. 第1次激發后豚鼠即開始喘息，表現為呼吸加深加快，肋間隙凹陷，哮喘發作嚴重者可出現窒息；喘息后即將動物移出瓶外，喘息可持續30 min，甚至更長；對照組同樣于第1日腹腔注射生理鹽水0.9 mg，1 wk后將動物置于半封閉玻璃罩內霧化吸人生理鹽水約20 min，隔日1次，霧化吸入生理鹽水8 wk.
1．2．2動物模型肺組織取材、固定、切片各組模型于末次激發48 h后以戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉豚鼠，開胸留取豚鼠左肺置于液氮中速凍，-70℃保存備用，經肺動脈灌注100 mL生理鹽水，繼以新配制的40 g/L多聚甲醛PBs（0.1 mol/L，pH 7.4）600 mL持續灌注90 min，并將右肺取下后固定24 h，入200 g/L蔗糖+含氟PB溶液中，4℃過夜至標本下沉，OCT包埋，恒冷箱切片機連續切片（厚15 μm），-20℃保存備用.
1．2．3免疫組化染色肺組織切片貼于載玻片上，室溫干燥30 min后，以0.01 mol/L KPBS(pH 7.4)浸洗，經800 mL/L甲醇+30 mL/L H2O2封閉15 min，KPBS浸洗3次×10 min，切片入兔抗MMP9血清(1∶100)室溫孵育24 h. KPBS浸洗3次×10 min，入結合生物素的羊抗兔IgG血清(1∶500)，室溫孵育2 h，KPBS浸洗3次×10 min，入ABC復合物(1∶500)室溫孵育2 h，葡萄糖氧化酶DAB硫酸鎳胺法顯色. 顯色反應終止后，常規脫水，中性樹膠封片. 同樣方法利用兔抗TIMP1染色切片. 每張切片在顯微鏡下隨機選取5個支氣管，以棕黃色顆粒在胞質的沉積為陽性. 圖像分析各支氣管細胞染色的平均密度以代表MMP9， TIMP1的表達強度.
轉貼于
1．2．4MP9及TIMP1半定量PCR用Trizol試劑提取備用肺組織總RNA；合成cDNA；半定量PCR反應體系：Taq酶33.34 nkat， Buffer 2 μL，dNTP (10 μmol/L)1 μL，MMP9上游引物(5′AAGGATGGTCTACTGGCACA3′)10 μmol/L， 0．5 μL，MMP9下游引物(5′GAAGATGAATGGAAATACGC3′， 10 μmol/L，）0.5 μL，模板1 μL，總反應體積20 μL. 反應條件：94℃ 1 min；56℃ 45 s；72℃ 1 min，35個循環. TIMP1引物：上游5′ACAGCTTTCTGCAACTCG3′，下游5′CTATAGGTCTTTACGAAGGCC3′，PCR產物長度為364 bp；條件：98℃，變性10 min，然后再94℃變性1 min，61 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共35個循環，最后，72℃延伸10 min. PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后采用凝膠成像分析系統讀取其灰度值.
統計學處理： 各組間數據以x±s表示，采用SPSS11.0統計軟件進行統計分析，采用ONEWAY ANOVA分析，組間兩兩比較采用SNKq檢驗，P
2結果
2.1哮喘動物模型的制作本實驗中對照組豚鼠每次霧化吸人生理鹽水均未見動物發生哮喘；各哮喘組第1次霧化吸人卵蛋白溶液可見哮喘發作，約激發3次可見明顯哮喘發作，哮喘發作重者甚至可窒息致死.
2.2組織病理學改變各組豚鼠肺組織冰凍切片光鏡下見：哮喘各組細支氣管上皮變性，細胞脫落，支氣管黏膜皺襞增多，肺泡隔增厚明顯，并隨著激發時間的增長逐漸增厚，在哮喘8 wk組表現最為明顯. 對照組豚鼠肺組織支氣管及肺泡結構正常(圖1).
2.3MMP9及TIMP1在豚鼠模型肺組織的表達結果顯示，哮喘各組與對照組比較差異有統計學意義(P
2.4豚鼠模型肺組織中MMP9和TIMP1 mRNA的表達水平由表2可見，MMP9的表達哮喘各組均高于正常對照組(P
A：對照組；B：激發4 wk組；C：激發6 wk組； D：激發8 wk組. 圖1各組豚鼠氣道的HE染色結果×200表1各組豚鼠支氣管MMP9， TIMP1免疫組化結果及MMP9/TIMP1比值變化(n=8， x±s)表2各組豚鼠支氣管MMP9， TIMP1 mRNA表達及MMP9/TIMP1比值變化(n=8， x±s)
3討論
長期以來，人們認為氣道重建的發生是在慢性炎癥基礎上逐漸進展的［3］. MMPs是調節ECM 代謝的主要限速酶，并在組織細胞的分化、維持正常組織結構、細胞信號轉導、血管形成、創傷的愈合、炎癥反應等多種生理病理過程中發揮重要作用. 所有的MMPs中，MMP9和哮喘關系最密切［4］. MMP9能降解多種ECM成分，TIMP1是 MMP9的特異性抑制劑. 在健康個體，MMP9和TIMP1以1∶1的比例共同釋放. 而在哮喘發作時痰液中測得MMP9/ TIMP1比值增高［5］，表明在哮喘氣道重構過程中，MMPs/TIMP表達失衡可能起到更為重要作用. 本實驗觀察發現，各哮喘組均存在氣道重建，并且隨著激發時間加長，豚鼠支氣管平滑肌厚度增厚，氣道重建的表現更加明顯. 哮喘發作時，MMP9升高，降解ECM，有利于炎癥細胞遷移至炎癥部分，同時MMP9降解的基質片斷具有對炎癥細胞的趨化作用，促進炎癥的進一步發展；當MMP9過度表達的同時，TIMP1也隨之升高以具有抑制MMP9的作用，并抑制ECM 的降解，而TIMP1的相對于MMP9的過度升高，最終導致MMPs/ TIMPs 比例平衡失調，細胞外基質代謝紊亂，促進氣道重建的發生和發展. 而在這個過程中，MMP9和TIMP1之間變化決定氣道重建的具體過程. MMP9/TIMP1比例可以作為一種顯示哮喘氣道組織破壞和修復之間平衡的標志［6］. 目前的研究結合本試驗的結果，都證實該聯系的存在. 由此可見，MMP9及TIMP1在不同時期的過度表達以及二者表達的比例失衡，是支氣管哮喘氣道炎癥與重構的重要機制之一，過度的MMPs表達與ECM 的降解有關，而TIMPs的過度上調，可能導致組織的異常修復. 本實驗結果提示采取措施抑制MMP9的過度表達，調節MMP9/TIMP1的平衡是防治哮喘氣道重構的新策略.
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Clinical Effect Observation of 40 Wean's Gluteus Contracture through Operation
Key words:Operation; Glutells Contracture; Effect Observation
小兒臀肌攣縮癥是由臀肌及其筋膜的纖維變性攣縮繼發髖關節屈曲、內收、內旋功能障礙，患兒表現為特有的外八字步態和姿勢異常的臨床病癥。我院對本病均采用手術治療，術后功能鍛煉，無一例復發，有效率100％。本文對我院自1993年以來，收治的臀肌攣縮癥進行總結報告如下。
1 臨床資料
1.1 一般資料 自1993年至2006年共收治小兒臀肌攣縮癥患兒40例，男28例，女12例，年齡4歲～17歲，平均年齡8歲。雙側對稱發病28例，雙側不對稱發病即一側重、一側輕12例。所收病例均有反復臀部肌肉注射史，注射藥物主要為青霉素、慶大霉素、安痛定等，所有病例均無家族史。
1.2 臨床表現 步態異常，行走時雙下肢呈輕度外展，外旋位，呈“外八字”狀，跑步時出現“跳步征”；站立時，雙下肢不能完全靠攏，輕度外旋，臀部尖削；坐立時，雙膝分開，不能靠攏，交腿征陽性；雙膝并攏不能下蹲，髖關節屈曲近90°，屈髖受限，出現“劃圈征”或“蛙腿征”；髖部彈響，屈伸髖關節時，在股骨大粗隆表面有索帶滑過并產生彈響；臀部可觸及一條與臀大肌纖維走行方向一致的攣縮帶，當髖關節內收內旋時更為明顯；骨盆X片，可見假性雙髖外翻，股骨頸干角＞130°；血液化驗，如肌酐、肌酸均正常，無肌肉病表現。
1.3 手術方法 消毒雙側術區，術中根據需要，取患側臥位。切口取臀大肌前緣波狀切口，長約10 cm，下至股骨大粗隆下2 cm止。顯露臀大肌筋膜，切除增厚的纖維化組織，繼之顯露臀大肌纖維攣縮條帶，將與周圍組織分開，于大粗隆上緣切除，如仍影響髖功能，應松解髂脛束，必要時松解周圍肌肉，最后依次探查中、小肌如有纖維攣縮病變一并松解。術中要被動活動髖關節，屈髖90°無彈響為止。術中徹底止血，術后放置引流，加壓包扎。
1.4 術后功能鍛煉 術后置于屈髖屈膝90°位，雙膝并攏下肢交叉固定；術后2天拔出引流條，床上練習仰臥起坐；術后4天，下地扶床頭作蹲起活動；術后傷口痛疼減輕，即作下地并膝行走；雙膝并攏固定2周，出院后功能鍛煉3個月。
2 療效標準及結果
根據功能障礙分級制定愈后標準，優：步態雙下肢并攏下蹲及蹺二郎腿均正常；良：步態雙下肢并攏下蹲及蹺二郎腿基本正常；中：達臀肌攣縮功能障礙分級輕度；差：與術前比較無明顯改善，見表1。
表1 治療效果對比情況(略)
3 討論
3.1 發病原因 一般認為臀肌攣縮癥系臀部肌肉注射后繼發的醫源性疾患，本院所收病例均有反復臀部肌肉注射史，也說明此點。任何注射劑均有刺激性，反復多次注射，可引起局部化學性炎癥，繼而發生纖維化、纖維組織增生，最后形成纖維痛瘢痕攣縮束帶，從而引起一系列癥狀及體征，由于雙側臀部接受肌肉注射的機會往往相等，故多雙側發病。
3.2 術中注意事項 所收病例術中發現病變范圍主要累及臀大肌的前下部分和闊筋膜張肌的后緣，但病變廣泛者可引起臀中肌變性、髖脛束或髖關節外旋肌、臀小肌、闊筋肌張肌等變性攣縮，偶見關節囊及皮膚皮下組織受累者。由于本病非手術治療無效，所以一旦確診，應盡早采取手術治療，與以往手術切口不同，我們取臀大肌前緣波形切口。由于臀部許多肌肉止于粗隆周圍，并且是肌肉筋膜病變最為嚴重的部位，因此，以股骨大粗隆為中心，使松解攣縮組織更為方便，并便于探查臀中、小肌。為正確判斷病情，術中應注意正確的髖關節檢查，具體方法是，無論單側、雙側發病，均消毒雙髖、雙下肢皮膚，這樣在檢查一側髖功能時，便于防止對側髖、膝關節屈曲，固定骨盆，排除骨盆移位所致假象，并可進行雙側對比，防止因兩側臀肌松解程度不一致而引起術后跛行及骨盆傾斜。若發現患側臀大肌、闊筋膜、髂陘束等攣縮組織松解后，髖關節在伸直位仍不能內收時，應考慮臀小肌受累的可能，這時首先探查臀中肌，有攣縮則予以松解，若無明顯病變，則將其向前牽引，顯露臀小肌，有變性，影響髖關節功能者，于大粗隆頂點徹底切斷臀小肌肌腱。術中應注意保護坐骨神經，防止誤傷，術后徹底止血，加壓包扎，防止血腫形成和發生感染。
3.3 術后早期功能鍛煉 可防止粘連，避免術后復發，提高整體療效，恢復關節的正常活動度，是手術治療小兒臀肌攣縮不可缺少的組成部分。
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摘 要：目的：從內皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)、6－酮－前列腺素F1α(6－keto－PGF1α)的角度說明射干麻黃糖漿治療豚鼠支氣管哮喘的機理。方法：選用荷蘭白種豚鼠，隨機分成4組，采用Barnes及呂寶璋方法進行哮喘遣模，觀察各組豚鼠血漿中ET,TXB2、6－keto－PGF1α含量的變化。結果：氨茶堿組和射干麻黃糖漿組動物血漿中ET、TXB2的含量低于模型組，6－keto－PGF1α的含量高于模型組。結論：射干麻黃糖漿是治療哮喘的有效方劑，其作用機理之一是提高血漿中ET,TXB2的含量和降低血漿中6－keto－PGF1α的含量。
關鍵詞：哮喘；射干麻黃糖漿；內皮素(ET)；血栓素B2(TXB2)；6－酮－前列腺素F1α(6－keto－PGF1α)
中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1673－7717(2007)07－1480－03
在我國，支氣管哮喘的患病率為1％－4％，并呈逐年增加的趨勢，其已成為嚴重威脅公眾健康的一種主要慢性疾病。
射干麻黃糖漿是以射干麻黃湯加上地龍、甘草等藥炮制而成，以《金匱要略》原文“咳而上氣，喉中水雞聲，射干麻黃湯主之”為理論基礎，用以指導治療發作期哮喘。本實驗旨在通過對哮喘豚鼠血漿中ET、TXB2、6－keto－PGF1α含量的研究，探討射干麻黃糖漿治療哮喘的作用機理。
1 材料與方法
1．1 實驗材料
1．1．1 動物荷蘭白種豚鼠加只，雄性，體重(350±50)g，由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供。實驗動物合格證書編號：遼實動質字[2000]019號。
1．1．2 療物中藥：射干麻黃糖漿，藥用：射干15g，麻黃8g，救冬花15g，細辛3g，紫菀15g，地龍15g，五味子15g，半夏15g，生姜15g，甘草15g，大棗6枚等12味。共4劑，常規煎煮成550mL的湯藥(即4mL湯藥中含有4g生藥)，再放入60％的糖和微量防腐劑制成射干麻黃糖漿。
西藥：氨茶堿片，赤峰制藥(集團)蒙欣藥業有限公司，內衛藥準字(1996)第000206，制成氨茶堿溶液，其含量為4mL溶液含0.015g氨茶堿。
1．1．3 試劑 蛋白片，上海化學試劑分裝廠，GB2756－81，批號92－11－28，購于沈陽醫藥股份有限公司。分別在使用前配成10％和1％的蛋白溶液。
1．1．4 試劑盒內皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)、6－酮－前列腺素F1α(6－keto－PGF1α)放免試劑盒，100規格，購于北京北方生物技術研究所。
1．1．5 儀器設備霧化器DS－671，5mL針管100個，低溫高速離心機MR1822 1400r/min souan法國
1．2實驗方法
1．2．1 實驗動物分組和飼養條件將實驗動物隨機分為4組：空白對照組、模型組、氨茶堿組、射干麻黃糖漿組。每組10只，分籠飼養，室內安靜，自然光照，通風良好，室溫20－26℃，濕度45％－65％，飼料為全價顆粒大鼠飼料和每日于市場購買的新鮮胡蘿卜、大頭菜，墊料為干草，每2－3天換1次墊料并進行室內消毒。
1．2．2 造模方法及給藥，豚鼠適應性飼養3天，熟悉環境后，進行造模，除空白對照組外，其余3組均腹部注射新鮮配置的10％蛋白溶液1mL，空白對照組腹部注射1mL生理鹽水，14天后，除空白對照組通過霧化器用生理鹽水進行噴霧激發無反應外，其余3組均通過霧化器用新鮮配置的1％蛋白溶液進行噴霧激發，直到出現煩躁、咳嗽、腹肌抽動、鼻翼煽動等癥狀，每日1次，于激發前灌胃，空白對照組和模型組給予4mL生理鹽水，射干麻黃糖漿組給予4mL射干麻黃糖漿(含4g生藥)，氨茶堿組給予4mL氨茶堿溶液(含0.015g氨茶堿)，并記錄各組噴霧激發到出現癥狀的時間。
1．3 取材和指標檢測
配制新鮮的20％氨基甲酸乙酯溶液(即烏拉坦)，腹腔注射進行麻醉，剖開胸腔，用一次性5mL注射器心臟穿刺取靜脈血2mL注入內含10％EDTA二鈉3μL和抑肽酶40μL的潔凈試管中，混勻，4℃，3000r/min離心10min，分離血漿，于－70℃下保存，待測ET。取一次性5mL空針吸取消炎痛－EDTA?Na2液約0.1mL，快速靜脈穿刺取血5mL。即刻在空針顛倒混勻，注入試管內，4℃，3500r/min離心15min，分離血漿，放-70℃下保存，待測TXB2和6－keto－PGF1α。檢測方法為免疫平衡法。
1．4統計方法
采用SPSS.11軟件進行方差分析。
2 結 果
哮喘激發后豚鼠皮毛沒有激發前光滑、柔順，食量減少；在4組中，模型組從激發開始到出現癥狀的時間比氨茶堿組和射干麻黃糖漿組短，模型組哮喘的程度比氨茶堿組和射干麻黃糖漿組重；從豚鼠精神狀態看，氨茶堿組和射干麻黃糖漿組的豚鼠的精神狀態好于模型組，其食量也比模型組大。見表1－3。
3 討 論
3．1 射干麻黃糖漿的藥理作用
中醫認為哮喘是宿痰內伏于肺，遇誘因而引發，使痰阻氣道，肺失肅降，氣道攣急。射干麻黃糖漿中用射干降逆行氣，開肺化痰；麻黃、細辛發散風寒于外，溫肺化飲于內，止咳平喘；紫菀、款冬花下肺氣之逆，降氣化痰，半夏燥濕化痰，生姜和胃化痰，五味子收斂肺氣，恐劫散之藥，傷其正氣，以大棗和胃健脾。再加上地龍、甘草等增強平喘止咳，祛痰作用。諸藥共奏溫肺逐飲、化痰降逆、下氣平喘之功。
現代醫學認為哮喘是多種炎癥細胞參與的氣道慢性炎癥，這種炎癥使氣道對各種激發因子產生氣道高反應性，同時引起氣道縮窄。現代藥理研究發現：麻黃對支氣管平滑肌有松弛作用，麻黃中Ephedroxane有利于呼吸道炎癥的消退，麻黃水提物、醇提物能抑制過敏介質釋放。射干具有抗炎、祛痰作用。細辛具有抗炎、抗變態及免疫抑制作用。地龍具有平喘作用，對支氣管具有顯著的舒張作用。款冬花、半夏、紫菀、五味子有鎮咳、祛痰作用，五味子同時對免疫功能有雙向調節作用。甘草具有具有增強免疫功能、抗過敏作用和平喘作用。生姜具有抗炎、鎮痛、松弛平滑肌作用。大棗具有抗變態反應作用。此外，還有一些臨床報道，認為射干麻黃湯可提高哮喘患者的肺功能，能降低血漿內皮素、
血漿黏度水平。所以，從現代藥理的角度看。射干麻黃糖漿可以治療哮喘。
3．2血栓素B2(TXB2)6－酮－前列腺素F1α(6－keto－PGF1α)內皮素(ET)作用
TXB2和6－keto－PGF1α是肺內含有的TXA2、PGI2的代謝產物，其活性穩定，TXA2對肺的血管和支氣管有強烈的收縮的作用，6－keto－PGF1α的生理作用與血栓素A2(TXA2)完全相反，有舒張肺血管的作用，并能抑制組胺及乙酰膽堿引起的支氣管平滑肌的收縮，缺氧時PGI2的作用更明顯。
ET在肺內的廣泛分布于肺血管，呼吸道上皮，黏膜腺體和擬交感神經節，在肺內，小支氣管的含量最高。ET是已知最強的氣管和支氣管平滑肌收縮劑，一些實驗證明，應用ET灌流肺，可以促進TXA2釋放，ET對肺血管的收縮具有快慢兩個時相，第I相可能是ET直接作用的結果，第n相可能是繼發TXA2釋放引起的。研究證明，ET可以誘導PGF2，促進糖蛋白的分泌，又可通過上皮細胞，產生PGI2，抑制黏膜腺體的分泌，前者是直接作用，后者是繼發效應。ET除以上作用，還可促進呼吸纖毛的擺動，增加擺動頻率，加強纖毛一黏液排送功能；它還能刺激肺泡巨噬細胞釋放花生四烯酸和TXB2，此外它對肺血管平滑肌和成纖維細胞亦有促進增殖的作用。
可見，炎癥刺激可促進ET、TXB2、6－keto－PGF1α的釋放，同時，此三者又可再刺激炎癥的產生，而三者本身也具有一定的相互作用，存在相互關聯。ET、TXB2都可使平滑肌收縮，6－keto－PGF1α可舒張平滑肌，因此三者在血漿中的值可以反應射干麻黃糖漿治療哮喘的療效。
【摘要】 【目的】觀察穴位經皮給藥藥貼對實驗性哮喘豚鼠血清中環氧化酶2(cox2)水平的影響。【方法】將48只豚鼠隨機分為正常對照組、模型組、地塞米松組和經皮給藥藥貼組，每組各12只。除正常對照組外，各組豚鼠均采用卵白蛋白致敏法復制實驗性過敏性哮喘模型。經皮給藥藥貼組采用大椎、肺俞、腎俞穴位貼敷治療，地塞米松組采用腹腔注射地塞米松05 mg/kg治療。采用酶聯免疫吸附法檢測各組豚鼠血清cox2水平，采用蘇木素—伊紅染色檢測各組豚鼠支氣管肺組織病理形態變化。【結果】模型組豚鼠血清cox2水平顯著高于正常對照組(p<005)，經皮給藥藥貼組、地塞米松組血清cox2水平顯著低于模型組(p<005)。模型組豚鼠支氣管肺組織出現明顯病理損害，經皮給藥藥貼組支氣管肺組織僅出現輕度病理改變。【結論】穴位貼敷經皮給藥藥貼可能通過降低血清中cox2水平，從而對哮喘產生治療作用。
【關鍵詞】 經皮給藥藥貼/治療應用;支氣管哮喘/穴位療法;環氧化酶2/血液;疾病模型，動物;豚鼠
哮喘是以多種炎癥基因表達增加或異常表達為特征，由多種炎癥細胞(嗜酸性粒細胞、t淋巴細胞、肥大細胞、巨噬細胞等)和氣道結構細胞(上皮細胞、血管內皮細胞、平滑肌細胞等)及細胞組分(細胞因子、化學因子、黏附分子、酶類和受體)參與的一種氣道慢性炎癥性疾患[1]。WwW.133229.CoM環氧化酶2(cox2)是一種誘導酶，它能促進細菌脂多糖、炎性細胞因子、生長因子和腫瘤啟動子的產生，與炎癥反應及腫瘤發生相關 [2] 。在哮喘的病理生理過程中cox2可能起了關鍵作用 [3] 。
近年來，應用穴位貼敷療法治療哮喘的研究較多[4] ，經皮給藥系統是藥物經由皮膚吸收進入人體血液循環，并達到有效血藥濃度、實現疾病治療或預防的一類貼劑(或貼片) [5] 。本實驗根據清代《張氏醫通》中記載的消喘膏加用麻黃為處方，利用現代藥物提純和經皮給藥技術制作成一種藥貼，觀察穴位貼敷經皮給藥藥貼對哮喘模型豚鼠血清cox2水平的影響，并探討其治療哮喘的療效機制。現報道如下。
1材料與方法
11實驗藥物、儀器及試劑雞卵白蛋白(美國sigma公司，批號：a5253)由廣州市威佳科技有限公司提供，地塞米松注射液由廣州白云山制藥廠提供，經皮給藥藥貼藥物質量比為：白芥子∶麻黃∶延胡索∶甘遂∶細辛=2∶2∶2∶1∶1，由南方醫科大學中藥制劑實驗室制備。wh22000型超聲霧化儀由廣東粵華公司生產，multiskan ii elisa檢測儀由芬蘭生產，ld42a型水平離心機由北京醫用離心機廠生產，bx50生物組織顯微鏡由日本olympus公司生產，eg1140石蠟包埋機、tp1020生物組織自動脫水機、rm2050石蠟切片機均為德國徠卡公司產品，cox2酶聯免疫吸附(elisa)試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供(產品編號為ek0603)。
12實驗動物分組及造模48只成年豚鼠，雌雄各半，體質量200～250 g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供(動物質量合格證號:0031706)。所有豚鼠隨機分為正常對照組、模型組、經皮給藥藥貼組和地塞米松組，每組各12只。控制室溫，各組在相同條件下飼養，先將動物飼養3 d適應環境后開始造模。第4天，除正常對照組外，其他各組均采用雞卵白蛋白致敏，常規消毒后一次性腹腔注射100 g/l卵白蛋白生理鹽水1 ml，使豚鼠處于致敏狀態[6]。第18天開始，將致敏的豚鼠置于密閉透明的塑料盒內，給予10 g/l卵白蛋白生理鹽水混懸液霧化吸入加以激發，每次30 s，1次/d，連續14 d，以腹式呼吸明顯，呼吸頻率加快且節律不整，活動減少等癥狀為誘喘成功。正常對照組以生理鹽水代替卵白蛋白生理鹽水，其致敏及誘喘時間同造模組。
13治療方法于哮喘發作次日開始治療：地塞米松組采用腹腔注射地塞米松05 mg/kg，隔天治療1次，共治療7次。經皮給藥藥貼組進行穴位貼敷治療，穴位選擇：大椎穴、肺俞穴(雙)、腎俞穴(雙)[7]。具體方法：將豚鼠頸背部穴位處用寵物電剪刀剪毛，剪毛范圍：縱向大椎至腎俞，橫向脊柱兩側各旁開15 cm，用大塊膠布將藥物敷貼固定于穴位處。每次敷藥6 h，治療時間與次數同地塞米松組。模型組造模成功后令其自然恢復，正常對照組不給予任何干預治療。
14樣本制備在末次誘喘后2～4 h內，給豚鼠稱體質量，用30 g/l戊巴比妥鈉按50 mg/kg腹腔注射麻醉豚鼠，迅速斷頭取血，每只取5 ml，室溫放置2 h后，3 000 r/min離心15 min，取上清液，放冰箱-20 ℃保存待測。同時迅速打開胸腔，暴露肺及心臟，常規取支氣管肺組織，避免鉗夾組織引起組織受壓影響觀察，取材部位：右中下肺取一橫切面，包括肺門。所取組織經100 g/l多聚甲醛固定，常規石蠟包埋和切片(厚4 μm)待測。
15檢測方法采用elisa法定量檢測各組豚鼠血清中cox2水平，嚴格按照試劑盒說明的方法和要求操作。采用光鏡觀察各組經蘇木素—伊紅(he)染色切片的支氣管肺組織形態變化。
16統計學方法所有實驗數據均在spss 130上建立數據庫、進行數據錄入與統計分析。各組間差異采用單向方差分析(oneway anova)，方差齊用lsd檢驗，方差不齊用tamhanes檢驗，檢驗水平α=005。
2結果
21動物數量實驗結束后，共剩豚鼠30只，每組隨機取6只，共24只納入結果分析。
22各組豚鼠血清cox2水平比較表1結果顯示：模型組豚鼠血清cox2水平顯著高于正常對照組(p<005)，經皮給藥藥貼組、地塞米松組血清cox2水平顯著低于模型組(p<005)。
23各組支氣管肺組織形態觀察結果正常對照組支氣管黏膜上皮完整，平滑肌無明顯的增厚，肺泡壁清晰完整，間隔形態正常，無明顯的炎癥細胞表1各組豚鼠血清cox2水平比較(x±s)浸潤。模型組支氣管管壁黏膜上皮細胞受損和脫落明顯，氣道壁不完整，黏膜下層炎癥明顯，氣道平滑肌增厚，膠原纖維增加，管腔狹窄，氣道腔內黏液分泌增多，黏液栓堵塞，氣道周圍嗜酸性粒細胞明顯增加，肺泡內可見彌漫性慢性炎細胞浸潤、管腔變窄，肺泡基本上實變，充滿炎癥細胞，有肺大泡形成，肺泡間隔有明顯充血。地塞米松組支氣管黏膜上皮基本完整，管壁平滑肌層有輕度的增厚，間質炎癥細胞較少，肺泡間隔基本完整，腔內有少量的炎癥細胞，肺泡間隙輕度充血以及有少數的炎癥細胞浸潤。經皮給藥藥貼組支氣管的黏膜上皮基本完整，平滑肌層有輕度的增厚，管周有少量的炎癥細胞，肺泡完整，間質輕度充血，結果見圖1(彩圖見第317頁)。
3討論
支氣管哮喘(哮喘)是當今世界最常見的慢性疾病，其病理生理改變以氣道慢性非特異性炎癥、氣道反應性增高及氣道重建為主要特征，三者相互作用、互相影響 [8] 。
哮喘的治療目前國內外首選消除非特異炎癥的糖皮質激素，但由于副作用大、成癮性強及易反復發作等缺點的存在，使其有效應用受到一定限制。穴位敷貼治療哮喘則是在傳統中醫針灸理論指導下發揮其獨特療效的 [9] 。 穴位敷貼給藥為一古老的中醫外治法，具有不經消化系統破壞和肝臟分解，維持較長時間且穩定的血藥濃度，從而使藥物作用時間長而穩定的優點。而且由于穴位給藥，藥物成分通過經絡感傳影響多層次的生理功能，它們之間可能產生相互激發和協調作用，導致生理上的放大效應，使藥物的外治效果可能優于內服 [10-11] 。本實驗光鏡觀察到的結果從病理角度驗證了穴位貼敷經皮給藥藥貼治療豚鼠哮喘的有效性。
哮喘的本質是炎性反應，來自體液直接反映炎癥存在情況的細胞因子或炎癥介質成為近年來的研究重點，如炎性反應環節中起著關鍵作用的cox2，已被視為快速炎癥反應的重要標志之一 [12] 。 cox2主要存在于氣道上皮細胞和平滑肌細胞，生理狀態下它幾乎不被表達，只有在炎性細胞因子或炎性介質將細胞激活的情況下才被表達[13]。哮喘患者氣道黏膜中有大量的單核—巨噬細胞、嗜酸性粒細胞及中性粒細胞浸潤，被激活后可產生大量的cox2，cox2是一種炎性酶，它的表達可誘導多種炎癥介質的表達，如前列腺素e2(pge2)、白細胞介素6(il6)、il8、il18等，這些炎癥介質又加重了炎癥反應，從而誘發哮喘或使哮喘加重，而且cox2的過度表達與氣道重塑和氣道氣流阻塞程度加重有關 [14-17] 。
本研究結果顯示，模型組豚鼠血清cox2水平顯著高于正常對照組(p<005)，表明cox2的表達與哮喘的發作密切相關。經皮給藥藥貼組、地塞米松組血清cox2水平顯著低于模型組(p<005)，說明地塞米松與經皮給藥藥貼均可能是通過影響cox2的表達而對哮喘發作產生治療作用。
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【摘 要】探討千佛菌對H22(肝癌)小鼠免疫功能的影響。方法：觀察各組Mφ、IL- 1含量,分別采用吞噬中性紅比色法、MTT 比色法進行測定。結果: 荷瘤小鼠模型組與正常組比較, Mφ吞噬功能、IL- 1含量均顯著降低( P
【關鍵詞】千佛菌; Mφ吞噬功能; IL- 1活性; H22
千佛菌是一種藥食兩用的真菌類植物,具有很好的保健作用和很高的藥用價值。賀新懷教授等研究發現［1-2］,千佛菌能提高腎陽虛小鼠和荷S180 肉瘤小鼠的免疫功能, 改善小鼠腎陽虛癥狀,抑制 S180肉瘤生長。本文以荷H22小鼠為研究對象, 探討千佛菌對Mφ吞噬功能和IL- 1產生的影響。
1材料和方法
1.1實驗材料
千佛菌購自陜西省鎮安縣千佛菌種植基地。
1.1.1藥液制備: 取千佛菌干品500g經蒸餾水洗滌后,加10倍量的蒸餾水,煎煮2次,每次30min,合并濾液,分成 2 份,分別濃縮至每毫升溶液相當于原藥材 1g( 1: 1)、2g( 2: 1),置于4℃備用。
1.1.2實驗動物: 健康昆明種小鼠,雌雄各半,18-20g,4-6 周齡。購自第四軍醫大學實驗動物中心。
1.1.3瘤株:H22瘤株由第四軍醫大學實驗動物中心提供。
1.1.4主要試劑: RPMI- 1640培養液購于Gibco 公司。LP S、ConA 購
于 Sigma 公司。MTT為Flrka公司產品。10% 活性小牛血清、PBS 購于華美生物公司。DMSO 國產分析純,購于成都化學試劑廠。
1.1.5主要儀器: 超凈工作臺,倒置顯微鏡,CO2恒溫培養箱,酶標儀,電子天平, 離心機,24及96孔細胞培養板。
1.2實驗方法
1.2.1動物分組、模型制備及用藥: 將昆明種小鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、千佛菌小劑量組、千佛菌大劑量組四組。除正常對照組外,其余三組皮下接種 H22瘤細胞懸液,制成小鼠荷瘤模型。然后千佛菌小劑量組、千佛菌大劑量組分別用 1: 1( 相當于原藥材 1g/ ml)、2: 1( 相當于原藥材2g/ ml) 濃度的千佛菌溶液灌胃 1m l, 正常對照組、模型對照組給予相同劑量的生理鹽水。各組均灌胃1次/d, 連續 14d。于第15天處死動物檢測指標。
1.2.2腹腔Mφ吞噬功能的測定:取各實驗組小鼠,按文獻［3］制備腹腔Mφ,濃度為 2×107/ml,加入 96孔細胞培養板 100μl/孔,每樣品二孔,37℃ ,5% CO2條件下培養2h,吸去未貼壁細胞,加入無菌 0.075% 中性紅溶液( pH7.2,用 PBS 配制),100μl/孔,混合培養15min,去上清, PBS洗三遍,加入 DMSO 100μl/孔,4℃過夜,待溶解后,酶標儀530nm處測定OD值。
1.2.3IL- 1活性測定:取健康昆明種小鼠,按文獻［3,4］制備胸腺細胞,以含 2.5 μg/mlConA,10%小牛血清的 RBM R-1640 培養液調整細胞濃度為1×107/ ml,加入96孔板,100 μl/孔,做5個平行孔,37℃、5%CO2條件下培養72h, 1500r/ min 離心10min,去上清,以不完全培養液洗滌3次,以完全 1640培養液重新調整細胞濃度為5×106/ ml,加入96孔板, 100μl/孔, 做5 個平行孔。按文獻［3,4］制備貼壁Mφ,加入含小牛血清10% , LPS10μg/ ml 的 RPMI - 1640 培養液10μl/孔,繼續培養24h,吸獲上清,做1:8,1:16兩個稀釋度,加入含有正常胸腺細胞的培養板,100μl/孔,每個稀釋度做3個平行孔, 并設陰性對照和絲裂原對照。將培養板置于37℃、5%CO2培養箱繼續孵育24h, 加入MTT液10μl/孔,加入DMSO,100μl/孔,振蕩混勻3min,待溶解后,酶標儀 530nm處測OD值。
1.2.4統計學處理
實驗數據用均數標準差（x±s）表示, 采用方差齊性檢驗, t 檢驗。
2實驗結果
2.1 千佛菌對荷瘤小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影響: 見表 1。
表1 千佛菌對荷瘤小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影響（x±s）
組別 n Mφ吞噬中性紅后細胞溶解OD值 P 值
空白對照組 10 0.5206±0.0589
模型對照組 8 0.3781±0.0311 < 0. 01
千佛菌小劑量組 10 0.4312±0.04557 > 0. 05
千佛菌大劑量組 10 0.4752±0.06886 < 0. 01
結果表明: 模型對照組與空白對照組比較, Mφ吞噬功能明顯降低(P< 0. 01)。大、小劑量組與模型對照組相比, Mφ吞噬功能有不同程度的改善,其中小劑量組經統計學分析無顯著差異,而大劑量組與模型對照組相比呈顯著差異(P
2.2千佛菌對荷瘤小鼠腹腔Mφ產生的IL- 1的影響: 見表 2
表 2千佛菌對荷瘤小鼠腹腔Mφ產生 IL- 1的影響（x±s）
組別 n Mφ培養上清 OD值
1: 8 P值 1: 16 P值
空白對照組 10 0. 5199±0. 0074 0. 4323±0.0688
模型對照組 8 0. 2759±0. 0322 < 0. 01 0. 2520±0.0030 < 0. 01
佛菌小劑量組 10 0. 3599±0. 0489 < 0. 05 0. 3011±0.0324 < 0. 05
千佛菌大劑量組 10 0. 4011±0. 0499 < 0. 01 0. 3122±0.0268 < 0. 01
結果表明:模型對照組與空白對照組比較,腹腔Mφ產生IL- 1的能力顯著降低( P< 0.01),大劑量組與模型對照組比較呈極顯著差異(P
2.3結論本實驗結果表明:千佛菌可顯著增強荷H22小鼠腹腔Mφ吞噬功能,提高Mφ分泌IL-1的水平。
3討論
在機體的免疫系統中,巨噬細胞是一種多功能的免疫細胞，在機體的非特異性免疫與特異性免疫應答過程中發揮著非常重要作用。表現在，巨噬細胞可通過氧依賴性途徑和氧非依賴途徑清除殺傷病原體;通過分泌眾多趨化因子與促炎癥細胞因子參與和促進炎癥反應;是專職的抗原提呈細胞,啟動特異性免疫應答;活化的巨噬細胞還可分泌多種細胞因子，參與免疫調節［5］。巨噬細胞產生的IL- 1是啟動抗菌炎癥反應的關鍵細胞因子,還可以參與到免疫調節中。
本研究結果說明,千佛菌能提高荷H22小鼠的Mφ的吞噬功能及IL- 1的產生作用。肝癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤。機體免疫力低下是腫瘤發生、發展的重要原因，而千佛菌可提高機體免疫功能，其抑瘤效應可通過進一步的實驗來研究。
參考文獻
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【摘要】 目的 通過逆轉錄-DNA聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測豚鼠哮喘模型氣管上皮內皮素-1（ET-1）mRˉNA表達，檢測哮喘患者氣管上皮內皮素-1（ET-1）和內皮素轉換酶（ECE）mRNA表達。方法 （1）動物實驗部分:Hartley株豚鼠用卵蛋白腹腔注射致敏，霧化吸入激發，提取氣管上皮細胞RNA，逆轉錄將RNA逆轉為cDNA，PCR擴增DNA。（2）臨床實驗部分:設對照組和哮喘組。一步法提取總RNA，逆轉錄合成cDNA，PCR擴增β-actin片段、ET-1片段和ECE片段。PCR產物的鑒定和半定量。計算ET-1/β-actin值和ECE/β-actin值。結果 （1）動物模型檢測:在電泳緩沖液內，紫外燈下可見ET-1為333bp左右條帶，與標記DNA條帶相對應。（2）臨床實驗:哮喘組ET-1mRNA表達量明顯高于對照組（P<0.05）。哮喘組ECEmRNA表達量與對照組比較差異無顯著性（P>0.05）。結論 RT-PCR技術檢測出卵蛋白致敏激發的豚鼠氣管上皮細胞ET-1mRNA表達。哮喘患者支氣管粘膜ET-1mRNA表達明顯增高，而ECEmRNA表達量與對照組比較差異無顯著性。
關鍵詞 RT-聚合酶鏈反應 內皮素-1 內皮素轉換酶
【Abstract】 Objective To detect the mRNA expressions of endothelin-1in tracheal epithelium cell from guinea pig asthma model by reverse transcriptional polymerase chain reaction，to detect the mRNA expressions of enˉdotheline-1and endothelin converting enzyme in tracheal epithelium cell from asthma patient.Methods （1）Animal experiment department:sensitize the guinea pig by inject ovi-protein into the abdominal cavity，excitation by aspirate the ovi-protein solutions，extract RNA from tracheal epithelium cell，reverse transcribe the RNA to cDNA，amplify DNA by polymerase chain reaction.（2）Clinical department:laying the asthema group and the control group，extract RNA from tracheal epithelium cell，reverse transcribe the RNA to cDNA，amplifyβ-actin、ET-1and ECE fragment by polymerase chain reaction.evaluate and semi-quantify the PCR product，calculate ET-1/β-actin and ECE/β-actin.Results （1）Animal experiment:we can see the ET-1is about a333bp strap in the electrophoresis solution under the infrared lamp，correspond with the marking strap.（2）Clinical department:The mRNA expressions of enˉdothelin-1of the asthema group is great high than the control group（P<0.05），the difference of mRNA expressions of ECE is not significant at two groups（P>0.05）.Conclusion It can detect the mRNA expressions of endothelin-l in tracheal epithelium cell from guinea pig asthma model by reverse transcriptional polymerasechain reaction.The mRNA expressions of endothelin-1of the asthema group is great high than the control group，The differece of mRNA expressions of ECE isnot significant at two groups.
Key words reverse transcriptional-polymerase reaction endothelin-1 endothelin converting enzyme
內皮素-1（ET-1）是至今所發現的最強烈的支氣管平滑肌收縮物質之一，并有促進成纖維細胞和平滑肌細胞增殖，以及促進粘膜下腺體分泌的作用 ［1］ 。研究發現ET-1參與哮喘的發病和發展 ［2，3］ ，哮喘患者和動物模型的血漿 ［4］ 或氣管上皮ET-1水平明顯增高 ［5］ 。研究豚鼠哮喘模型氣管上皮細胞ET-1mRNA表達的測定方法有助于進一步闡明支氣管哮喘的發病機制，迄今尚未見有關報道。本實驗通過逆轉錄-DNA聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測豚鼠哮喘模型氣管上皮ET-1水平 ［6］ ，現報告如下。
1 對象與方法
1.1 動物實驗部分 （1）對象:健康Hartley株豚鼠（復旦大學醫學院動物房提供）共16只，體重200～250g，雌雄不拘。（2）主要儀器設備和試劑:DNA TRERMAL CYCLER480型自動PCR儀（PERKIN ELMER CETUS），CSD-L型超靜臺（上海凈化設備廠），DY-A型電泳儀（上海生化工程研究所基巴斯公司），BF-300紫外線檢測儀（四星公司），ALARM-1000型高速低溫離心機（計田公司），37型霧化吸入器（ARI公司），擴增引物、逆轉錄酶、Taq酶及有關試劑購于上海試劑廠、上海基因公司、上海基康公司。（3）方法:①動物模型的建立:用10%卵蛋白溶液按100mg/kg，約0.2～0.25ml，對豚鼠行腹腔內注射致敏，2周后用1%卵蛋白溶液3ml霧化吸入，每次1min，每天1次共3次，激發豚鼠。②提取氣管上皮細胞RNA:脫頸椎處死豚鼠，75%乙醇頸部皮膚消毒，剪開并固定皮膚，取出氣管，刮凈氣管外膜，用生理鹽水沖洗，置消毒平皿，攜入超靜臺，剪開氣管，加Trizol ［8］ 液1ml，用Tip頭刮取氣管上皮，并吹打至無團塊，移入1.5ml EP管中，室溫放5min，加0.3ml氯仿，用力晃搖1min，室溫放3min，低溫離心12000r/min×15min，將無機相移入新EP管中，加0.5ml異丙醇，室溫放5min，低溫離心12000r/min×20min，去上清液，加1ml75%乙醇洗管，加1ml100%乙醇，放入冰箱-70℃保存。③逆轉錄將RNA逆轉為cDNA:將保存RNA的EP管低溫離心10000r/min×10min;去上清液，加20μl DEPC水置于冰上，吸取4μg RNA液，加DEPC水稀釋至12μl;加1μl Randon Prine，置70℃水浴×10min;加RT mix:Buffer5μl、dNTP2.5μl、M DTT2.5μl、RNase inhibitor1μl、M-MLV RTase1μl，置40℃水浴×1h，置95℃水浴×5min;加GOOD WATER35μl至60μl:-20℃保存。（4）聚合酶鏈反應（PCR）擴增DNA ［7］ :取cDNA液5μl、GOOD WATER35μl、Buffer5μl、Mgcl 2 2μl、引物各1μl、dNTP0.5μl、Taq酶0.5μl;94℃水浴×2min（94℃水浴×1min63℃水浴×2min72℃水浴×2min，共5個循環）（94℃水浴×1min60℃水浴×1min72℃水浴×1min，共30個循環）72℃水浴×7min。
1.2 臨床實驗部分
1.2.1 對象 對照組10例，平均年齡（41±9）歲;哮喘組10例，平均年齡（38±7）歲，實驗前3個月未應用糖皮質激素治療。兩組均為男性。
1.2.2 方法 （1）在電子纖維支氣管鏡直視下，鉗取右中間支氣管粘膜活組織3～5塊。（2）根據一步法提取總RNA。（3）逆轉錄合成cDNA:取總RNA約1～5μg，用逆轉錄試劑盒（上海基因公司）合成cDNA。（4）PCR擴增cDNA:由上海生化工程公司合成以下引物:①肌動蛋白（β-actin）:上游:5′ATGTGGCACCACACCTTCTACATGAGCTGCG3′下游:5′CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTGC3′用此對引物擴增出838bp的β-actin片段。②ET-1引物:上游:5′AACˉCATGGATTATTTGTCCATG3′下游:5′AGTGTTGACCˉCAAATGATGTCC3′用此對引物擴增出230bp的ET-1片段。③ECE引物:上游:5′AGCGTGAGCGAGGCAGAGAG3′，下游:5′GGGGTAGAAGATGGTGTTGA3′，用此對引物擴增出567bp的ECE片段。④PCR反應條件:ET-1:92℃1min42℃2min72℃3min，共35循環。加強延伸:72℃10min。ECE:94℃1min59℃2min72℃1min，共35循環。加強延伸:72℃7min。（5）PCR產物的鑒定和半定量:反應完成后，取1～5μl PCR反應液進行2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察，可見ET-1為230bp條帶、ECE為567bp條帶、β-actin為838bp條帶。在紫外凝膠圖像分析儀上進行熒光度測定，計算ET-1/β-actin值和ECE/β-actin值。
1.3 統計學方法 兩組實驗結果以平均數±標準差表示，組間顯著性差異檢驗采用配對t檢驗。
2 結果
2.1 動物模型檢測結果 在2%瓊脂糖內加入0.5μg/ml的溴化乙錠（EB），在加樣孔內加入待測DNA與標記DNA，放入電泳儀，在電泳緩沖液內，電壓80mV下電泳20～30min，放在紫外燈下觀察，可見ET-1為333bp左右條帶，與標記DNA條帶相對應 ［9］ 。
2.2 臨床實驗結果 兩組均有ET-1和ECEmRNA的表達。哮喘組ET-1mRNA表達量（ET-1/β-actin值為0.81±0.04）明顯高于對照組（0.11±0.02），P<0.05。哮喘組ECEmRNA表達量（ECE/β-actin值為0.33±0.25）與對照組（0.32±0.12）比較差異無顯著性，P>0.05。見表
1。
表1 哮喘組ET-1和ECE mRNA的表達 （略）
關鍵詞 經皮穿刺內窺鏡下胃造瘺術 康復護理 吞咽功能康復訓練 中、重度吞咽功能障礙
中圖分類號：R473.6； R493 文獻標識碼：B 文章編號：1006-1533（2013）05-0018-05
據文獻報道，40%～73%的腦血管病患者會發生不同程度的吞咽功能障礙[1]。腦血管病和顱腦外傷導致的吞咽功能障礙表現為飲水嗆咳、吞咽困難，常導致吸入性肺炎、甚至窒息死亡。因此，如何解決和改善社區康復護理中的患者的中、重度吞咽功能障礙意義重大。本研究采用前瞻性研究方法，觀察社區中中樞性中、重度吞咽功能障礙患者在經皮穿刺內窺鏡下胃造瘺術（percutaneous endoscopic gastrostomy， PEG）后胃腸營養方式下[2-3]接受12周系統、規范的康復護理和吞咽功能康復訓練的效果，以探討規范的康復護理聯合吞咽功能康復訓練對改善中樞性吞咽功能障礙患者的功能狀態的影響及意義。
1 對象
本文觀察對象為于2010年1月1日至2012年4月30日間在復旦大學附屬華山醫院康復醫學中心住院并接受康復治療的中、重度吞咽功能障礙患者，系在社區中臨床診出的新發腦血管意外或顱腦外傷患者并已經顱腦CT或磁共振成像檢查結果的確診。
1）入選標準：首次發病的腦血管病或顱腦外傷患者；病程為發病后4周～24個月；意識清醒；愿意簽署知情同意書；年齡在18～80歲間；有中、重度的吞咽功能障礙（《洼田飲水試驗》評分4～5分）。
2）排除標準：活動性肝病或肝、腎功能不全患者；充血性心力衰竭患者；惡性腫瘤患者；惡性進行性高血壓患者；癡呆患者；呼吸功能衰竭患者；昏迷者；首次發病4周以內或大于24個月患者；既往有腦血管病或顱腦外傷史且遺留吞咽困難癥狀者；原有其他疾患導致吞咽困難者；居住外地無法隨訪者；既往有精神病史患者；聾、啞人；拒絕簽署知情同意書者。
本研究得到復旦大學附屬華山醫院醫學倫理委員會的認可。
2 方法
2.1 康復護理
2.1.1 PEG術前的康復護理
PEG置管前應進行術前心理疏導，取得患者及其家屬的理解和配合，同時注意患者的情緒，給予適當的安慰和鼓勵，消除患者對病情及手術的疑慮和悲觀情緒。術前8 h起需禁食、禁水[3-4]。
2.1.2 PEG術后的康復護理要點
PEG術后應在患者的護理記錄中記下置入體內的造瘺管的品牌、型號、管徑和長度以及置管醫師的緊急聯系方式。置管后6～8 h內應監測患者的各項生命體征（意識、脈搏率、呼吸和血壓）。這些參數可以提示有無出血、特別是內出血。術后6～8 h內造瘺管可連接引流袋，注意觀察引流袋內容物的顏色和量，如顏色見紅、量多要及時告知醫師。術后24 h～1周內應每天消毒造瘺創口處、更換敷料，觀察造瘺口周圍皮膚有無發紅、出血、腫脹、硬結和過敏反應等，同時輕輕旋動造瘺管外固定裝置180°，確保PEG管至少有5 mm的移動空間，避免其與創面擠壓過緊而導致創面缺血或發生“包埋”綜合征。術后48 h內造瘺管固定應較緊以防出血，以后可稍放松以防止皮下組織缺血壞死，但需固定好以防止胃內容物滲漏入腹腔；術后2周后因竇道形成，可適當放松。不應在置管后10 d內去除造瘺管，而須在胃腹壁竇道形成后才能將管去除。8～10個月后可用內窺鏡檢查造瘺管內側管口的狀況及位置[2-9]。
術后要根據醫囑適當給予抗生素治療3～5 d，同時積極祛痰、經靜脈補足液體量。
2.1.3 術后營養供給與給藥護理
術后6～8 h內禁水、禁食，防止誤吸和嗆咳。術后喂養宜在置管后6～8 h后開始，最好在24 h后滴入營養液；管飼喂養前后至少要用25～30 ml的無菌生理鹽水或滅菌水沖洗管道，且應至少每8小時沖洗1次以防止管道堵塞。營養液的配制應選用易被腸道吸收的營養物，原則上以高熱量、高蛋白、高纖維素及微量元素為主，如“能全力”營養液等。營養液的滴入應遵循先慢后快、先薄后濃、先少后多的原則。瓶裝腸內營養液懸掛滴注的時間不應超過8 h；袋裝營養液懸掛滴注的時間不應超過24 h。竇道形成后每天的營養液可使用50 ml注射器推注，每2～3小時供給1次（從早晨6：30～晚上21：30），每次可推注入200～300 ml（不要超過400 ml），推注時間應大于10 min，推注前后要用25～30 ml的無菌生理鹽水或滅菌水沖洗管道，而營養液的溫度以保持37～40 ℃為宜。管飼時患者應采用30°～45°半坐臥位，這有利于食物進入小腸；管飼結束后應保持半坐位30 min，以避免返流。每當連接新的一袋（瓶）腸內營養液（勻漿）或對管道是否位于正常位置有懷疑時都應使用pH試紙來確定管道的位置，pH應
術后6～8 h后可以給藥，但要確認給予的所有藥物必須是液體或可研磨成細的粉末并與凈水混勻，可用注射器抽取藥液并推入管道；每次給藥前后都要用25～30 ml的無菌生理鹽水或滅菌水沖洗管道。對不宜（易）碾碎使用的緩、控釋片劑和膠囊藥物以及較易引起管道堵塞的藥物，建議少用或以針劑替代[4-5]。
2.1.4 術后沐浴護理
患者可在置管24～48 h后或7～10 d后經醫師復查確認無異常后再淋浴。造瘺口完全愈合后，造瘺口周圍皮膚用肥皂水清洗就可，但沖洗前需去掉敷料，徹底沖洗以祛除殘留的肥皂水并保持局部皮膚干燥[5-6]。
2.1.5 防止導管堵塞的護理
當營養液輸注速度很慢或沖洗管腔有阻力時，可能系營養液或藥物在管壁沉積、使導管堵塞所致。此時可以用30 ml溫熱凈水沖洗管腔并用50 ml注射器及時反復抽吸，以促使管腔內沉積物或凝結塊松脫[4-6]。
2.1.6 防止導管脫落（斷裂）和拔管時的護理
PEG置管后，如護理不當，偶可出現導管脫落或斷裂。此外，因臨床治療安全性需要或患者吞咽功能恢復良好，也需要拔管。為預防導管脫落或斷裂，應妥善固定導管，在導管上做好標記以便及時發現導管脫出；另外，可在患者衣服上縫個小孔，導管從孔中穿出，用膠布或夾子將導管相對固定在衣服上，避免牽拉、折疊和彎曲導管以及由于導管晃動或牽拉等而引起患者不適或疼痛。一旦出現導管脫落或斷裂，要及時施行PEG置管更換術。患者吞咽功能恢復良好需拔管時，應使用內窺鏡于胃腔取出造瘺管蘑菇頭。拔管后用凡士林紗布加壓覆蓋瘺口，2～3 d后即可愈合，但拔管后需禁食24 h[4-8]。
2.1.7 護理中應觀察的其他異常問題
在對患者的康復護理過程中，要勤于觀察和記錄，同時還可能發現以下異常情況：①造瘺管管口周圍皮膚出現紅、腫、疼痛、滲液或有膿液等現象；②管口有血液滲出或大便發黑或有紅色血液，考慮內出血可能；③導管滑出、插入深度變淺或皮膚出處刻度改變2 cm以上；④管口局部出現肉芽組織；⑤患者出現8 h以上的反復嘔吐或持續24 h以上的惡心或腹瀉、或胃腸積氣或積液24 h以上，影響營養液或勻漿的攝入；⑥便秘3 d以上或大便干結5 d以上；⑦體重1周內下降1 kg以上或增加1 kg以上、或出現眼瞼和（或）足踝水腫；⑧出現原因不明的發熱或虛弱。如在護理過程中發現上述異常情況，護理人員應該及時與主管醫師聯系和溝通，從而及時查明原因、提出切實可行的解決辦法，避免發生嚴重的并發癥[2-9]。
2.1.8 出院回社區后的護理指導
患者病情改善后可以帶著PEG置管回家，但需指導患者及其家屬切實掌握造瘺管的護理及其技能：①應選用新鮮、高營養、溫度適宜的流質或半流質食物并制成勻漿以利消化，避免過于油膩、過冷、過熱或過硬的食物；②推注用品應保持清潔；③指導推注的速度、量和溫度，推注前后應用溫開水沖洗管腔，每次推注入食物后應讓患者坐起30 min以防返流致管腔堵塞；④指導患者休息、活動或沐浴時應將造瘺管固定在胸腹壁上，尤其是在沐浴后應該保持造瘺口皮膚干燥；⑤指導患者及其家屬在出現問題時及時與相關醫務人員取得聯系。長期置管后PEG管會出現老化或滲漏，一般半年到2年需在原位更換造瘺管[5-6]。
2.2 吞咽功能康復訓練
社區中的中、重度中樞性吞咽功能障礙患者在同意接受PEG并簽署知情同意書后通過聯系消化內窺鏡診治中心、由急救車轉診至消化內窺鏡診治中心施行PEG，術后病情平穩后再轉診返回社區康復病房，開始接受規范的康復護理和吞咽功能康復訓練。患者接受康復醫院自制的營養均衡勻漿以保證營養和熱量，同時接受為期12周的吞咽功能康復訓練。其中，前8周每周指導訓練5次、每次30 min，后4周每周指導訓練1次、每次30 min；其余時間指導患者家屬或護工進行康復護理和輔助吞咽功能訓練。吞咽功能康復訓練的具體內容主要包括吞咽功能基礎訓練、進食訓練、部分聯合間接訓練方法和代償策略[9-12]。隨訪過程中如患者出現吸入性肺炎且體溫大于38.5 ℃并持續2～3 d，則暫停吞咽功能康復訓練。
2.3 主要觀察指標及評定方法
采用《洼田飲水試驗》評分標準[13]，對每例患者在入選時（w0）以及入選2周后（w2）、4周后（w4）、8周后（w8）和12周后（w12）的臨床吞咽功能分別進行測評，同時記錄患者的身高、體重、吸入性肺炎和PEG置管相關并發癥情況等相關指標。
3 結果
10例患者于發病（9.2±5.5）個月后入選，其中腦血管病7例、腦外傷3例，男6例、女4例，平均年齡為（43.2±16.8）歲，入選前共計發生過23人次的吸入性肺炎。無病例失訪。10例患者在w0、w2、w4、w8和w12時的《洼田飲水試驗》評分均分分別為5.0、4.7、3.9、3.1和2.4分，在w2、w4、w8和w12時的《洼田飲水試驗》評分平均改善值分別是0.3、1.1、1.9和2.6分；在w0、w2、w4、w8和w12時的平均體重指數分別為20.32、20.29、20.45、20.74和21.04，在w12時的平均體重和體重指數分別改善2.1 kg和0.72（表1）。
在整個隨訪期，僅有1例患者因吞咽功能改善而成功拔除了PEG置管，但共發生5人次肺部感染、1例PEG造瘺管管口輕度感染、1例PEG術后胃出血、2人次因PEG造瘺管內置蘑菇頭脫落至十二指腸球部而堵塞腸管、1次造瘺管外部橡皮管斷裂。
4 討論
中、重度吞咽功能障礙常見于腦血管病和顱腦外傷患者，嚴重影響患者的生存質量。因此，如何對社區中的中、重度吞咽功能障礙患者進行康復護理和吞咽功能康復訓練、提高其生存質量是社區康復護理工作應予重點關注的問題之一[14]。
對經臨床治療后病情穩定且意識清醒、但若采用補償性吞咽手法或通過改進食物性狀等方法仍然不能經口獲得足夠的營養和水的腦血管病和顱腦外傷患者，PEG是一種較好的經導管輸入胃腸內營養方式[2-4，15-16]。本研究觀察了在PEG這種胃腸營養方式下的康復護理和吞咽功能康復訓練效果。
本研究采用《洼田飲水試驗》評分、體重和體重指數等相關指標來衡量患者在康復護理和吞咽功能康復訓練前后的相關功能和指標變化。從患者各階段的《洼田飲水試驗》評分以及12周后的體重和體重指數的改善值可以看出，規范的康復護理聯合吞咽功能康復訓練能夠明顯改善患者的吞咽功能。
然而，因PEG置管這種胃腸營養方式在國內應用不多且多用于危重患者或在重癥監護室內應用，故相關醫務人員、患者家屬和護工對PEG造瘺管的管理和護理都缺乏相應的經驗。在本研究過程中，由于研究團隊的醫護人員也有一個從最初不了解PEG置管相關康復護理知識到逐步熟悉的過程，所以在研究初期出現了1例PEG造瘺管管口輕度感染、2人次因PEG造瘺管內置蘑菇頭脫落至十二指腸球部所致腸管堵塞以及在研究中期出現了1次造瘺管外部橡皮管斷裂。通過提高康復護理人員的造瘺管管理和護理水平，這些現象可相應減少、甚至完全避免。
PEG置管后的康復護理相當重要。對康復護理人員（包括醫師、護士和護工）甚至患者家屬和患者本人普及基本的PEG置管后的護理要點、營養和藥物供給方法、沐浴護理等康復護理知識非常重要，能夠幫助避免術后并發癥的出現[16-18]。例如，本研究中的2人次PEG造瘺管內置蘑菇頭脫落至十二指腸球部所致腸管堵塞就是由于護理人員沒有及時發現導管皮膚處刻度改變2 cm以上引起的，而造瘺管外部橡皮管斷裂也是由于護理人員沒有按照營養供給前后應常規以25～30 ml凈水沖洗、導致管腔堵塞和護工在每次給予藥液或營養液后都會折疊橡皮管并用橡皮筋固定而最終導致管子折斷引起的。這些異常情況在加強康復護理后均未再發生。
此外，在本研究初期有1例患者在造瘺術后出現了胃出血并發癥，但因康復護理人員發現較早并及時采取了處理措施，未導致嚴重后果。另外，在PEG置管營養方式下，由于免除了上呼吸道和消化道刺激以及胃賁門口處于自然開合狀態，患者的吸入性肺炎發生次數減少、僅發生了5人次的吸入性肺炎，有利于患者的吞咽功能康復訓練，也有利于患者的吞咽功能恢復[19-23]。
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